EVALUACIÓN DE LA ACTIVACIÓN PLAQUETARIA EN PLASMA RICO EN PLAQUETAS DE RATAS WISTAR

Resumen

Las plaquetas son fragmentos celulares sin núcleo contenidos en el plasma sanguíneo de los animales, que tienen una gran importancia fisiológica, ya que liberan proteínas y factores de crecimiento que influyen en la regeneración celular de los tejidos blandos y óseos. Su importancia en la medicina veterinaria y humana ha llevado al estudio de biotecnologías que buscan reproducir e intensificar su función en el organismo, como es el caso del plasma rico en plaquetas (PRP), que concentra un número de plaquetas de 3 a 5 veces mayor que el volumen inicial. Existen varios métodos de preparación del PRP, que difieren en el número de veces que se centrifuga el plasma, el número de rotaciones por minuto y, en consecuencia, hay variaciones en los resultados obtenidos, como la concentración y la morfología plaquetaria. El objetivo de este estudio fue comparar dos protocolos de elaboración del PRP que son de bajo costo y fáciles de preparar para analizar en laboratorio la morfología y la integridad de las plaquetas en ratas Wistar albinas con el fin de verificar posibles alteraciones derivadas de la manipulación. Para ello, se tomaron muestras de sangre mediante punción cardíaca con agujas hipodérmicas y jeringas desechables, que contenían anticoagulante CPDA-1, de 12 ratas Wistar albinas, adultas, machos, previamente anestesiadas con cetamina (60 mg/kg) y xilazina (10 mg/kg). Las muestras se dividieron en alícuotas y se colocaron en tres tubos: 500 µL (sangre total) y 1500 µL en cada uno de los dos tubos para obtener el PRP mediante los protocolos PRPS (Sonnleitner et al. (2000) modificado) y PRPV (Vendramin et al. (2006) modificado). Tras la recogida, las muestras de PRP se diluyeron en V-52D DILUENT y, a continuación, se realizaron los recuentos de plaquetas de las muestras de sangre total y PRP en un contador automático de células sanguíneas modelo BC-5000 Vet® (Sherzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co. Ltd. Shenzhen. Guangdon China, al igual que las muestras de PRP. Para la evaluación morfológica de las plaquetas se realizaron frotis de las muestras de sangre total y PRP que se tiñeron con colorante Romanowsky para su lectura en microscopio óptico; y para la evaluación del marcador de activación plaquetaria se utilizó el método ELISA, para la medición del factor 4 plaquetario. El análisis estadístico se realizó en el programa Jamovi (versión 2.4.11), con análisis de varianza (ANOVA), seguido de la prueba de Shapiro-Wilk. Los resultados del recuento plaquetario revelaron que las concentraciones plaquetarias estaban de acuerdo con las propuestas por Marx et al. (1998). La evaluación morfológica de las plaquetas de los frotis de ST (68 ± 22 %), PRPS (74 ± 18 %) y PRPV (75 ± 14 %) no difirió entre los grupos. Del mismo modo, la cantidad de factor 4 plaquetario no difirió entre los grupos.