AVALIAÇÃO DA ATIVAÇÃO PLAQUETÁRIA NO PLASMA RICO EM PLAQUETAS DE RATOS WISTAR

Resumo

As plaquetas são fragmentos celulares anucleados contidos no plasma sanguíneo dos animais, as quais possuem extrema importância fisiológica, pois liberam proteínas e fatores de crescimento que influem na regeneração celular de tecidos moles e ósseos. Sua importância na medicina veterinária e humana levou ao estudo de biotecnologias que buscam reproduzir e intensificar sua função no organismo, como é o caso do plasma rico em plaquetas (PRP), o qual concentra um número de plaquetas de 3 a 5 vezes maior que o volume inicial. Existem diversos métodos de confecção do PRP, que divergem no número de vezes em que o plasma é centrifugado, número de rotações por minuto, e consequentemente, há variações nos resultados obtidos, como concentração e morfologia plaquetária. Este estudo teve como objetivo comparar dois protocolos de confecção do PRP que sejam de baixo custo e de fácil preparo para analisar laboratorialmente a morfologia e a integridade das plaquetas em ratos Wistar albinos com a finalidade de verificar possíveis alterações decorrentes da manipulação. Para tal, foram colhidas amostras de sangue por punção cardíaca com agulhas hipodérmicas e seringas descartáveis, contendo anticoagulante CPDA-1, de 12 ratos Wistar albinos, adultos, machos, previamente anestesiados com cetamina (60mg/kg) e xilasina (10mg/kg). As amostras foram aliquotadas e acondicionadas em três tubos: 500 µL (sangue total) e 1500 µL em cada um dos dois tubos para obtenção do PRP por protocolos PRPS (Sonnleitner et al. (2000) modificado) e PRPV (Vendramin et al. (2006) modificado). Após a colheita, as amostras de PRP foram diluídas em V- 52D DILUENT e em seguida, foram realizadas as contagens de plaquetas das amostras de sangue total e de PRP em contador automático de células sanguíneas modelo BC-5000 Vet® (Sherzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co. Ltd. Shenzhen. Guangdon China, assim como as amostras de PRP. Para a avaliação morfológica das plaquetas foram realizados esfregaços das amostras de sangue total e de PRP que foram coradas por coloração de Romanowsky para leituras em microscópio óptico; e para a avaliação do marcador de ativação plaquetária foi utilizado o método ELISA, para mensuração do fator 4 plaquetário. A análise estatística foi realizada no programa Jamovi (versão 2.4.11), com análise de variância (ANOVA), seguida do teste de Shapiro-Wilk. Os resultados da contagem plaquetária revelaram que as concentrações plaquetárias estavam de acordo com as propostas por Marx et al. (1998). A avaliação morfológica das plaquetas dos esfregaços de ST (68±22%) , PRPS (74±18%) e PRPV (75±14%) não diferiram entre os grupos. Da mesma forma, a quantidade de fator 4 plaquetário não diferiu entre os grupos